显色反应条件的选择

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(1)显色剂用量
设M为被测物质，R为显色剂，MR为反应生成的有色配合物，则显色反应可表示为：
             M + R ═ MR
从平衡的角度看，加入过量的显色剂有利于MR的生成，但过量太多也有副作用，例如增加了试剂空白或改变了MR的组成等，因此R一般应适当过量。R用量可通过实验选择，法是固定被测组分浓度和其他条件，然后加入不同量的R，分别测定吸光度A，绘制吸光A-显色剂浓度CR曲线。如图1-19所示的三种情况。
图1-19中(a)曲线表明CR在曲线水平范围内A出现稳定值，故可在此范围内选择合适的R用量。这类显色反应生成的MR稳定，对CR控制不太严格；(b)曲线表明CR虚线所示的围内A比较稳定，因此在显色时要严格控制CR;(C)曲线表明，随着CR增大，A不断增大，这种情况下必须十分严格控制CR或另换合适的显色剂。

(2)溶液的酸度
酸度是显色反应的重要条件。因为多数R是有机弱酸或弱碱，溶液的pH值直接影响R解离程度，从而影响显色反应的完全程度。对于形成多级配合物的显色反应来说，pH值变化可生成具有不同配位比的配合物，产生颜色的变化。如Fe^3+与水杨酸在pH <4、pH≈4～7、pH≈8～10 三种条件下，分别生成配位比为1:1、1:2、1:3三种配合物，颜色分别为紫红色、橙红色和黄色。可见只有控制溶液的pH值在一定范围内，才能获得组成恒定的有色配合物，得到正确的结果。另外，溶液酸度过低可能引起被測金属离子水解，因而破坏了色配合物，使溶液颜色发生变化，甚至无法测定。
综上所述，酸度对显色反应的影响是很大的而且是多方面的，适宜的酸度是通过实验来确定的。方法是固定待测组分及显色剂浓度，分别测定不同pH值条件下显色溶液的吸光度，作A -pH曲线，选择曲线中吸光度较大且恒定的平坦区所对应的pH值范围。
(3)显色温度
不同的显色反应对温度的要求不同。大多数显色反应是在常温下进行的，但有些反应受温度影响较大。因此对不同的反应，应通过实验找出各自适宜的显色温度范围。由于温度对光的吸收剂颜色的深浅都有影响，因此在绘制标准曲线和进行样品测定时，应使温度保持一致。
(4)显色时间
显色反应应从两方面考虑时间的影响。一是显色反应完成所需的时间，二是显色后有色合物色泽保持稳定的时间。确定适宜时间的方法：配置一份显色溶液，从加入显色剂开始，每隔一定时间测吸光度一次，绘制A-t(时间)曲线。曲线平坦部分对应的时间就是测定吸光度适宜的时间。
(5)溶剂的选择
有机溶剂常常可以降低有色物质的解离度，增加有色物质的溶解，从而提高了测定的灵敏度。此外，有机溶剂还可能提高显色反应的速度，影响有色配合物的溶解度和组成等。利用有色化合物在有机溶剂中稳定性好、溶解度大的特点，可以选择合适的有机溶剂，采用萃取光度法来提高方法的灵敏度和选择性。