紫外可见分光光度计测量条件的选择

1．入射波长的选择
当用分光光度计进行测定时，应先做出吸收曲线，选用吸收曲线，一般选择λmax为入射光波长，这样灵敏度最高。如果λmax处有共存组分干扰时，则应考虑选择灵敏度稍低但能避免干扰的入射光波长（应选曲线较平坦处对应的波长）。
2．参比溶液的选择
在分光光度分析中测定吸光度时，由于入射光的反射，以及溶剂、试剂等对光的吸收会成透射光强度的减弱，为使测得的的吸光度真正反映待测溶液吸光强度，需要选择合适组分的溶液做参比溶液，先以它来调节透射比100%(A =0，然后再测定待测溶液的吸光度。样就可消除显色溶液中其他有色物质的干扰，抵消吸收池和试剂对入射光的吸收，比较真实地反映了待测物质对光的吸收，因而也就比较真实地反映了待测物质的浓度。
①溶剂参比。若仅待测组分与显色剂反应产物在测定波长处有吸收，其他所加试剂均吸收，用纯溶剂（水或其他有机溶剂）作参比溶液。这样可消除溶剂、吸收池等因素的影响。
②试剂参比。若显色剂或其他所加试剂在测定波长处略有吸收，而试液本身无吸收，用“试剂空白”（不加试样溶液）作参比溶液，这样可消除试样中的组分产生的影响。
③试液参比。若待测试液在测定波长处有吸收，而显色剂等无吸收，则可用“试样空白”（不加显色剂）作参比溶液。这样可消除试样中有色离子的影响。
④其他参比。若显色剂、试液中其他组分在测量波长处有吸收，则可在试液中加入适当掩蔽剂将待测组分掩蔽后再加显色剂，作为参比溶液。另一种方法是用不含被测组分的试样，与被测试样同时进行相同的处理，得到平行操作参比溶液。如血液中药物浓度监测，取不含药物的血样制备平行操作参比溶液。
总之，选择参比溶液时，应尽可能全部抵消各种共存有色物质的干扰，使测得的吸光度真正反映待测溶液的浓度。
3．吸光度测量范围的选择
由于测量过程中光源的不稳定，读数的不准确或实验条件的偶然变动等因素的影响，任何分光光度计都有一定的测量误差，但对一个给定的分光光度计来说，透射比读数误差ΔT都是一个常数，其值约在±0.25%-2%，但透射比读数误差不能代表测定结果误差，测定结果误差常用浓度的相对误差Δc/c表示。由于透射比与浓度之间为负对数关系，故同样透射比读数误差ΔT在不同透射比处所造成的Δc/c是不同的。是否存在最佳读数范围，何值时误差最小，不同的透光度读数，产生的误差大小不同。
测量时吸光度过高或过低，误差都较大，一般适宜的吸光度范围是A =0.80～0.20。实际工作中，可通过调节被测溶液的浓度（如改变取样量、稀释溶液等），使用不同厚度的吸收池来调整待测溶液的吸光度，使其在适宜范围内。
4．狭缝宽度的选择
在定量分析中，狭缝宽度直接影响测定的灵敏度和标准曲线的线性范围。狭缝宽度太大，入射光的单色性下降，标准曲线偏离吸收定律，线性范围变窄，准确度降低；狭缝宽度太小，光强减弱，测量的灵敏度降低。选择狭缝宽度的方法：测量吸光度随狭缝宽度的变化，狭缝宽度在一个范围内变化时，吸光度是不变的，当狭缝宽度大到某一程度时，吸度才开始减小。因此在不减小吸光度时的最大狭缝宽度，就是应该选取的合适的狭缝宽度。

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